膳食纖維檢測(cè)酶-重量法1.原理：樣品分別用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶進(jìn)行酶解消化以去除蛋白質(zhì)和可消化的淀粉?？偵攀忱w維(TDF)是先酶解，然后用乙醇沉淀，再將沉淀物過濾，將TDF殘?jiān)靡掖己捅獩_洗，干燥稱重。不溶性和可溶性膳食纖維(IDF和SDF)是酶解后將IDF過濾，過濾后的殘?jiān)脽崴疀_洗，經(jīng)干燥后稱重。SDF是將上述濾出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再過濾，干燥，稱重。TDF、IDF和SDF量通過蛋白質(zhì)、灰分含量進(jìn)行校正。
2.適用范圍AOAC991.43本方法適用于各類植物性食物和保健食品。
3.儀器
3.1燒杯：400或600ml高腳型。
3.2過濾用坩堝：玻料濾板，美國(guó)試驗(yàn)和材料學(xué)會(huì)(ASTM)40-60μm，Pyrex60ml(CorningNo.36060buchner，或同等的)。如下處理：(1)在灰化爐525℃灰化過夜。爐溫降至130℃以下取出坩堝。(2)用真空裝置移出硅藻土和灰質(zhì)。(3)室溫下用2%清洗溶液浸泡1小時(shí)。(4)用水和去離子水沖洗坩堝;然后用15ml丙酮沖洗然后風(fēng)干。(5)在干燥的坩堝中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重。(6)在干燥器中冷卻1小時(shí)，記錄坩堝加硅藻土重量，精確至0.1mg。
3.3真空裝置：(1)真空泵或抽氣機(jī)作為控制裝置。(2)1L的厚壁抽濾瓶。(3)與抽濾瓶相配套的橡皮圈。
3.4振蕩水浴箱：(1)自動(dòng)控溫使溫度能保持在98±2℃。(2)恒溫控制在60℃。
3.5天平：分析級(jí)，精確至±0.1mg。
3.6馬福爐：溫度控制在525±5℃。
3.7干燥箱：溫度控制在105和130±3℃。
3.8干燥器：用二氧化硅或同等的干燥劑。干燥劑兩周一次在130℃烘干過夜。
3.9PH計(jì)：注意溫控，用pH4.0、7.0和10.0緩沖液標(biāo)化。
3.10移液管及套頭：容量100μl和5ml。
3.11分配器或量筒：(1)15±0.5ml，供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。(2)40±0.5ml，供分配緩沖液。
3.12.磁力攪拌器和攪拌棒。
4.試劑全過程使用去離子水，試劑不加說明均為分析純?cè)噭?/div>
4.1乙醇溶液：(1)85%：加895ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀釋至刻度。(2)78%：加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀釋至刻度。
4.2丙酮：
4.3供分析用酶：在0-5℃下儲(chǔ)存。(1)熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液：Cat.No.A3306，SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO63178，或Termamyl300L，Cat.No.361-6282，Novo-Nordisk，Bagsvaerd，Denmark，或等效的酶。(2)蛋白酶：Cat.No.P3910，SigmaChemicalCo.，或等效的。當(dāng)天用MES/TRIS緩沖液中現(xiàn)配50mg/ml酶溶液。(3)淀粉葡糖苷酶溶液：Cat.No.AMGA9913，SigmaChemicalCo.，或等效的。
4.4硅藻土：酸洗(Celite545AW，No.C8656，SigmaChemicalCo.，或等效的)。
4.5洗滌液：兩者挑一。(1)鉻酸：120g重各酸鈉Na2Cr2O7·2H2O，1000ml蒸餾水和1600ml濃硫酸。(2)實(shí)驗(yàn)室用液體清潔劑，預(yù)備急需清洗的(Micro，InternationalProductsCorp.，Trenton，NJ08016，或等效的)。用水配制2%溶液。
4.6MES-TRIS緩沖液：0.05mol/L，溫度在24℃時(shí)pH值為8.2。(1)MES：2-(N-嗎啉代)磺酸基乙烷(No.M-8250，SigmaChemicalCo.或等效的)。(2)TRIS：三羥(羥甲基)氨基甲烷(No.T-1503，SigmaChemicalCo.或等效的)。在1.7L的蒸餾水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS，用6mol/LNaOH調(diào)pH到8.2，用水定容至2L。(注意：24℃時(shí)的pH為8.2，但是，如果緩沖液溫度在20℃，pH就為8.3，如果溫度在28℃，pH為8.1。為了使溫度在20-28℃之間，需根據(jù)溫度調(diào)整pH值。)
4.7鹽酸溶液：0.561mol//L，加93.5ml6mol/L鹽酸到700ml水中，用水定容至1L。
更新時(shí)間：2021-07-26
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